作者：朱旭芬
页数：211
出版社：高等教育出版社
出版日期：2006
ISBN：9787040183641
电子书格式：pdf/epub/txt
内容简介
本书全面涵盖了基因文库的构建、目的基因的获得、载体质粒的制备、表达质粒的构建与诱导表达等内容。
本书特色
本书是生物技术和生物工程专业规划教材。本书以基因克隆为主线，选编了35个实验，实验既重视对学生基本实验操作技能的培养和训练，又注重对学生研究能力以及分析和解决问题能力的培养，以激发学生的学习和研究兴趣。本书可为初学者提供有益的帮助，也可为科研人员提供参考。
目录
实验计划表导论1 基因文库的构建1—1 染色体DNA的提取1—2 总RNA和mRNA的提取1—3 噬菌体DNA的提取1—4 染色体DNA的部分消化1—5 基因组文库的构建1—6 cDNA合成1—7 cDNA文库的构建2 目的基因的获得2—1 PCR扩增及RT—PCR2—2 核酸电泳2—3 核酸探针的标记及检测2—4 核酸探针筛选基因文库
3 载体质粒的制备3—1 质粒DNA的提取与纯化3—2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定4 扩增质粒的构建4—1 限制性内切酶的酶切反应4—2 凝胶电泳法进行DNA的分离、提纯4—3 DNA片段的体外连接
5 重组DNA导入宿主细胞5—1 感受态细胞的制备5—2 重组质粒的转化6 重组子的筛选与鉴定6—1 阳性克隆的筛选6—2 测序与序列同源性分析6—3 Southern印迹7 表达质粒的构建与诱导表达7—1 表达质粒的构建7—2 Northern印迹7—3 外源基因的诱导表达7—4 SDS—PAGE7—5 Western印迹7—6 酶联免疫吸附测定（E1ISA）7—7 蛋白质生物功能测定法
8 工程菌的培养与目标产物分离8—1 发酵条件的优化8—2 诱导表达蛋白质的分离沉淀8—3 凝胶过滤层析8—4 离子交换层析8—5 蛋白质浓度的测定8—6 酶活性的测定8—7 分离纯化蛋白的收率计算与保存参考文献附录1 简写附录2 实验注意事项附录3 如何撰写实验报告附录4 常用的碱基、氨基酸符号及缓冲液附录5 大肠杆菌基因型附录6 培养基与试剂的配制附录7 实验仪器
3 载体质粒的制备3—1 质粒DNA的提取与纯化3—2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定4 扩增质粒的构建4—1 限制性内切酶的酶切反应4—2 凝胶电泳法进行DNA的分离、提纯4—3 DNA片段的体外连接
5 重组DNA导入宿主细胞5—1 感受态细胞的制备5—2 重组质粒的转化6 重组子的筛选与鉴定6—1 阳性克隆的筛选6—2 测序与序列同源性分析6—3 Southern印迹7 表达质粒的构建与诱导表达7—1 表达质粒的构建7—2 Northern印迹7—3 外源基因的诱导表达7—4 SDS—PAGE7—5 Western印迹7—6 酶联免疫吸附测定（E1ISA）7—7 蛋白质生物功能测定法
8 工程菌的培养与目标产物分离8—1 发酵条件的优化8—2 诱导表达蛋白质的分离沉淀8—3 凝胶过滤层析8—4 离子交换层析8—5 蛋白质浓度的测定8—6 酶活性的测定8—7 分离纯化蛋白的收率计算与保存参考文献附录1 简写附录2 实验注意事项附录3 如何撰写实验报告附录4 常用的碱基、氨基酸符号及缓冲液附录5 大肠杆菌基因型附录6 培养基与试剂的配制附录7 实验仪器
