基因工程分册-基因工程及其分子生物学基础-第2版

1 基因工程的四大要素及实施要点1.1 基因工程操作中常用的工具酶1.2 基因的分离1.3 基因工程载体1.4 受体细胞和重组基因的导入1.5 基因重组的方法1.6 基因重组体的筛选2 外源基因在宿主细胞中的高效表达2.1 有效的转录起始与基因的高效表达2.2 mRNA的有效延伸和转录终止与基因的高效表达2.3 mRNA的稳定性与基因的高效表达2.4 有效的翻译起始与基因的高效表达2.5 遗传密码应用的偏倚性与基因的高效表达2.6 mRNA的二级结构与基因的高效表达2.7 RNA的加工与基因的高效表达2.8 mRNA序列上终止密码的选择2.9 表达质粒（或载体）的拷贝数及稳定性与基因的高效表达2.10 外源蛋白的稳定性与基因的高效表达3 基因的融合和融合蛋白的表达3.1 利用基因融合技术表达外源基因的缘由3.2 基因融合的策略3.3 基因融合和重组蛋白的产生3.4 基因融合和展示筛选3.5 基因融合和蛋白分泌3.6 融合蛋白的纯化3.7 融合蛋白的位点特异性切割附录 重组蛋白表达和纯化中常用的融合标签4 外源基因的分泌表达4.1 外源基因在E.coli细胞中的分泌表达4.2 外源基因在枯草杆菌中的分泌表达4.3 a-因子前导序列介导的酵母细胞分泌系统4.4 外源基因在哺乳动物细胞中的分泌表达5 重组蛋白的正确折叠及修饰5.1 重组蛋白的可溶性表达和折叠5.2 重组蛋白的重折叠5.3 外源蛋白在翻译后的修饰6 几种真核细胞表达系统6.1 哺乳动物细胞表达系统6.2 外源基因在哺乳动物细胞中的组成性表达和诱导性表达6.3 核型多角体病毒为载体的昆虫（细胞）表达系统6.4 转基因动物及其应用6.5 转基因植物及其应用6.6 DNA疫苗7 分子杂交技术7.1 探针与目标核酸相互作用的原理7.2 探针的选择和特异性7.3 杂交的速率与探针长度、浓度及杂交加速剂的关系7.4 杂交的最适条件7.5 放射性探针的制备7.6 非放射性探针的制备7.7 放射性和非放射性标记探针的应用范围7.8 DNA微阵列——基因组芯片8 粒子轰击和基因转移8.1 粒子轰击技术简介8.2 粒子轰击技术的应用范围9 聚合酶链反应及其应用9.1 聚合酶链反应的原理9.2 标准的PCR扩增方案9.3 PCR引物及其设计9.4 关于热稳定的DNA聚合酶9.5 PCR对模板质量的要求9.6 PCR反应缓冲液和循环（周期）数9.7 PCR相关技术的原理及其应用10 各种生物学展示技术10.1 噬菌体展示技术10.2 细菌展示技术10.3 酵母展示技术10.4 核糖体展示技术10.5 mRNA展示技术11 基因打靶技术及其应用11.1 同源重组与基因打靶11.2 组织特异性的基因打靶11.3 转座子介导的基因打靶11.4 RNA干涉与基因敲除11.5 反义核酸技术11.6 细菌基因敲除方法11.7 基因打靶技术的应用12 DNA序列分析12.1 Sanger的双脱氧链终止测序法12.2 Maxam-GilbertDNA化学降解法12.3 关于变性聚丙烯酰胺测序凝胶12.4 全基因组DNA序列的分析13 基因突变13.1 寡核苷酸介导的基因突变13.2 盒式突变法13.3 利用PCR进行DNA序列的突变13.4 关于随机突变14 寡核苷酸的化学合成14.1 寡核苷酸片段固相合成的原理及步骤14.2 寡核苷酸片段的纯化及鉴定15 蛋白质相互作用及其分析方法15.1 蛋白质相互作用的重要性15.2 蛋白质相互作用所产生的结果15.3 蛋白质相互作用的类型15.4 酵母双杂交系统15.5 利用绿色荧光蛋白(GFP)片段重组装研究蛋白质相互作用——细菌双杂交法15.6 蛋白质相互作用分析的in vitro方法16 蛋白质一核酸相互作用16.1 研究蛋白质一核酸相互作用的重要性16.2 蛋白质一核酸相互作用的类型16.3 蛋白质一核酸相互作用分析的in vitro方法17 蛋白质工程概述17.1 蛋白质分子的结构分析17.2 蛋白质的结构预测与分子设计17.3 基因工程是实现蛋白质工程的关键技术参考文献