作者：汪峻主编
页数：157
出版社：华中师范大学出版社
出版日期：2014
ISBN：9787562266433
电子书格式：pdf/epub/txt
内容简介
本书是为高职高专院校生物技术类专业编写的专业课教材, 系统而简洁地介绍了基因操作技术的基本原理、基本操作和实际应用。全书分为6个项目, 内容包括基因操作的基本过程、核酸的分离纯化技术、目的基因克隆技术、DNA体外重组技术、目的基因的表达与鉴定、生物信息技术。
作者简介
汪峻，2008年至今就职于湖北生物科技职业学院，承担了《工业微生物育种技术》和《基因操作技术》等课程的教学工作。长期从事微生物学研究，在微生物分离培养、鉴定，基因工程菌株构建和生物大分子相互作用等方面有着丰富的经验。主持湖北省教育厅科学技术研究计划指导性项目（B类）《黄鳝嗜水气单孢菌菌蜕疫苗的制备研究》。
目录
任务1．1 基因操作的基本概念
任务1．2 基因操作的基本过程
项目小结
复习思考题
项目2 核酸的分离纯化技术
任务2．1 核酸的结构与功能
2．1．1 棱酸的化学结构
2．1．2 DNA的结构与功能
2．1．3 RNA的结构与功能
2．1．4 核酸的理化性质
任务2．2 基因与基因组
2．2．1 基因概念的发展
2．2．2 基因的结构特征
2．2．3 染色体
2．2．4 基因组
任务2．3 基因组DNA的分离纯化
2．3．1 植物组织基因组DNA的提取
2．3．2 动物组织及血液中基因组DNA的提取
2．3．3 线粒体DNA的提取：碱变性法提取缦粒体DNA
2．3．4 细菌基因组DNA的制备，SDS法提取细菌总DNA
2．3．5 病毒DNA的制备
2．3．6 质粒DNA的分离纯化
实训1 碱裂解法制备小量细菌质粒DNA
任务2．4 RNA的分离纯化
2．4．1 总RNA的分离纯化
2．4．2 mRNA的分离纯化：oligo（dT）纤维素柱法
任务2．5 核酸的检测与保存
2．5．1 紫外分光光度法
实训2 紫外分光光度法测定核酸含量
2．5．2 凝胶电泳法
实训3 琼脂糖凝肢电泳检测DNA
2．5．3 桩酸的保存
项目小结
复习思考题
项目3 基因克隆技术
任务3．1 目的基因的扩增
3．1．1 PCR基本原理
3．1．2 PCR反应体系与编程
3．1．3 引物设计
3．1．4 常用PCR技术类型
实训4 PCR扩增目的基因
任务3．2 栽体及其改造
3．2．1 常用载体
3．2．2 常用工具酶
实训5 质粒DNA的酶切
实训6 琼脂糖凝胶中回收DNA片段
项目小结
复习思考题
项目4 DNA体外重组技术
任务4．1 重组DNA的构建
4．1．1 黏性末端的连接
4．1．2 平末端的连接
4．1．3 人工黏性末端的连接
4．1．4 人工接头法连接
4．1．5 T／A克隆连接
4．1．6 重组DNA构建应注意的事项
实训7 DNA片段的连接
任务4．2 重组DNA的转化
4．2．1 重组质牲转化大肠杆菌
4．2．2 重组DNA转染真棱细胞
实训8 大肠杆菌感受态细胞的制备
实训9 重组质粒的转化
任务4．3 重组子的筛选与鉴定
4．3．1 遗传学检测法
4．3．2 DNA凝肢电泳检测法
4．3．3 核酸分子杂交检测法
4．3．4 免疫学检测法
4．3．5 核酸序列分析法
实训10 转化子的筛选与鉴定
项目小结
复习思考题
项目5 目的基因的表达与鉴定
任务5．1 基因表达调控原理
5．1．1 原核生物基因表达调控机制
5．1．2 真核生材基因表达调控机制
任务5．2 目的基因的表达
5．2．1 目的基因在原核系统中的表达
5．2．2 目的基因在真核系统中的表达
实训11 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达
任务5．3 目的蛋白的鉴定
5．3．1 SDS—聚丙烯西胺凝肢电泳
5．3．2 Western杂变
5．3．3 等电聚焦电泳
5．3．4 双向电泳
实训12 SDS—PAGE检测表达蛋白质
项目小结
复习思考题
项目6 生物信息技术
任务6．1 生物信息学概念
任务6．2 生物信息数据库
6．2．1 基因和基因组数据库
6．2．2 蛋白质数据库
任务6．3 数据的查询与提交
6．3．1 数据查询
6．3．2 向Genbank提交序列数据
6．3．3 序列文件格式
任务6．4 序列比对与数据库搜索
6．4．1 序列两两比对
6．4．2 多序列比对
6．4．3 数据库搜索
项目小结
复习思考题
附录
参考文献
节选
《基因操作技术（第2版）/21世纪高等职业教育规划教材·生物学系列》： b.单层培养细胞直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm直径的培养板）加1mL，用移液器吸打几次。Trizol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。Trizol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。 c.细胞悬液离心收集细胞，每5×106～5×107个动物、植物、酵母细胞或1×107个细菌细胞加入1mLTrizol，反复吸打。加Trizol之前不要洗涤细胞，以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。 ②将匀浆样品在室温（15℃～30℃）下放置5min，使核酸蛋白复合物完全分离。 ③如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或胞外物质（肌肉、植物结节部分等），可于2℃～8℃，10000r·min—1离心10min，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高相对分子质量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。 ④每使用1mLTrizol加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15s，室温下放置3mm。 ⑤于2℃～8℃，10000r·min—1离心15min。样品分为3层：底层为黄色有机相，上层为无色水相，另有一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用Trizol试剂的60%。 ⑥把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mLTrizol加入0.5mL异丙醇，室温下放置10min。 ……
