基因操作技术

绪论

一、基因操作技术概述

（一）基因操作的发展简史

（二）基因操作的四大要素

（三）基因工程制药的技术路线

二、基因操作的工具酶

（一）限制性内切核酸酶

（二）DNA连接酶

（三）DNA聚合酶

（四）RNA聚合酶

（五）DNA修饰酶

（六）细胞裂解酶

三、基因工程制药

（一）基因工程制药的发展

（二）基因工程药物的研发过程

（三）常用的基因工程药物

项目一 获得靶基因

任务一 提取基因组DNA

一、核酸的基础知识

二、基因组DNA的提取

三、构建基因文库

四、化学法合成DNA

任务二 扩增靶基因

一、PCR法克隆基因

二、从基因文库中筛选靶基因

任务三 检测靶基因

一、电泳法检测核酸

二、紫外分光光度法测定核酸

三、荧光定量PCR测定核酸

四、核酸样品的序列分析

任务四 纯化靶基因

一、纯化DNA的方法

二、纯化DNA的质量要求

三、纯化DNA常见问题

项目二 制备载体

任务一 提取质粒载体

一、质粒载体

二、噬菌体载体

三、酵母2 μm质粒

四、动物基因克隆载体

五、植物基因克隆载体

六、人工染色体载体

任务二 酶切与纯化质粒载体

一、酶切的识别序列与切割位点

二、酶切后的末端

三、酶切方法

四、限制性内切核酸酶的影响因素

项目三 基因重组与转化筛选

任务一 制备感受态细胞

一、原核宿主细胞

二、酵母宿主细胞

三、哺乳动物宿主细胞

四、昆虫宿主细胞

任务二 DNA片段的连接

一、DNA连接酶的种类

二、DNA片段的连接方法

任务三 重组质粒的转化

一、原核宿主细胞重组基因的导入

二、植物宿主细胞重组基因的导入

三、动物宿主细胞重组基因的导入

任务四 筛选目的重组子

一、遗传表型直接筛选

二、依赖重组子结构特征分析筛选

三、核酸分子杂交分析

四、免疫化学分析检测

五、PCR筛选法

项目四 靶基因的诱导表达与产物检测

任务一 靶基因的诱导表达

一、外源基因的表达过程

二、外源基因表达的调控

三、外源基因的表达系统

任务二 检测靶基因表达产物

一、外源靶基因表达产物的检测

二、外源靶基因表达产物的分离纯化

附录一 常用试剂及溶液配制

附录1-1 试剂

附录1-2 溶液的配制

附录二 常用仪器的使用方法

附录2-1 微量移液器的使用

附录2-2 PCR仪的使用

附录2-3 漩涡混合仪的使用

附录2-4 电泳仪的使用

附录2-5 凝胶成像仪的使用

参考文献